кандидат химических наук, доцент, кафедра аналитической химии, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева»
Руденко Алена Игоревна
Студентка, медицинский институт, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева»
Романова Элла Викторовна
кандидат химических наук, доцент, кафедра биологической и фармацевтической химии с курсом организации и управления фармацией, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева»
Лабзина Людмила Яковлевна
кандидат биологических наук, профессор, кафедра биологической и фармацевтической химии с курсом организации и управления фармацией, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева»
Среди гиполипидемических лекарственных препаратов одно из ключевых мест занимают статины, обладающие селективным и конкурентным угнетающим действием на фермент ГМГ-КоА-редуктазы в печени, за счет уменьшения скорости превращения ГМК-КоА в мевалонат, способствуя тем самым снижению общего холестериналипопротеинов низкой плотности и холестерина в плазме крови [1]. Среди лекарственных препаратов данной группы выделяют статины природного (ловастатин, провастатин), полусинтетического (симвастатин) и синтетического (аторвастатин, розувастатин, флувастатин) происхождения.
В фармакопейном анализе статинов базовое место отводится хроматоргафическим методам. Так Государственная Фармакопея XII рекомендует использовать метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) как для количественного определения симвастатина, так и для оценки содержания специфических родственных примесей (ловастатина, эпиловастатина и других). В качестве подвижной фазы используют системы, состоящие из ацетонитрила и 0,1% раствора ортофосфорной кислоты (1:1) и 0,1% раствор ортофосфорной кислоты в ацетонитриле при скорости потока подвижной фазы 3,0 мл/мин. Для хроматогрфирования используют колонку с эндкепированным октадецил силикагелем (С18) с зернением 3,0 мкм при температуре 298 К. Детектирование рекомендуется проводить спектрофотометрически на длине волны 238 нм. Определение содержания симвастатина проводят по соотношению площадей пика соединения на хроматограмме испытуемого препарата, содержащего точную навеску субстанции в пределах 40 мг в растворе калия фосфата однозамещенного с концентрацией 1,4 г/л и рН 4,0 (получают добавлением фосфорной кислоты концентрированной), смешанного с ацетонитрилом в объемном соотношении 40:60, и площади пика симвастатина на хроматограмме раствора сравнения, содержащую такую же навеску СО симвастатина в том же растворителе [2, c. 627].
При определении β-гидроксисимвастатина в плазме крови разработана оригинальная методика ВЭЖХ-определения[3]. Поскольку симвастатин является про-лекарством, переходящим в активную форму в процессе гидролитического расщепления лактонного цикла после поступления в организм, в биологических объектах наиболее актуальной является разработка методики определения активной формы – β-гидроксисимвастатина с использованием системы серии «Стайер» со спектрофотометрическим детектором UVV 104. Хроматографирование проводилось с использованием обращенно-фазовой колонки «Becham Coulter» с зернением 5 мкм. Для проведения хроматографического определения был установлен оптимальный состав подвижной фазы, который должен содержать ацетонитрил и фосфатный буфер в соотношении 70:30. рН подвижной фазы доводят до 4,5 добавлением концентрированной ортофосфорной кислоты. Хроматографирование проводилось при скорости потока 1 мл/мин, время удерживания фазы β-гидроксисимвастатинапри этом составляло 12±0,3 мин. Пробоподготовка образцов плазмы крови сводилась к жидкостной экстракции β-гидроксисимвастатина в органическую фазу, состоящую из дихлорметана и пропанола-2 с последующим удалением органической фазы в роторно-вакуумном испарителе.
Для количественного определения β-гидроксисимвастатина использовался метод абсолютной калибровки по высоте хроматографических пиков в концентрационном диапазоне от 100 до 5000 нг/мл.
Согласно требованиям фармакопейной статьи для ВЭЖХ определения аторвастатина кальция тригидрата в качестве растворителя используется диметилформамид, а подвижной фазой является система растворителей, содержащая тетрагидрофуран – ацетонитрил – раствор аммония ацетата с концентрацией 3,9 г/л, значения рН которого до 5,0 ± 0,1 доводят добавлением ледяной уксусной кислоты. Объемное соотношение компонентов подвижной фазы – 12:21:67. Возможно также использовать в качестве подвижной фазы аналогичную систему, но при соотношении компонентов 12:61:27[4].
В биологических пробах (плазме крови) предлагается проводить количественное определение аторвастатина методом ВЭЖХ на хроматографе с диодно-матричным детектором на колонке Supelcosil LC-18 с диаметром частиц стационарной фазы 5 мкм, используя в качестве подвижной фазы систему, состоящую из ацетонитрила и буферированного (рН 4,0) раствора однозамещенного фосфата натрия с концентрацией 0,05 моль/л. В качестве внутреннего стандарта предлагается использовать диклофенак натрий [5,6].
Пробоподготовку биологических объектов рекомендовано проводить методом твердофазной экстракции на патроне С18 360 мм 0,85 мл Sep-Pac (США), используя смесь 2 мл плазмы крови с равным объемом фосфатного буфера. После обработки аторвастатин переводят в 5 мл метанола, который затем удаляют выпариванием под вакуумом. После очистки пробы центрифугированием, ее вводили в петлю хроматографа в объеме 20 мкл.
Метод ВЭЖХ с успехом может быть применен для количественной оценки содержания лекарственных препаратов группы статинов как в лекарственных препаратах, так и в биологических объектах на уровне терапевтических концентраций.
Список использованных источников
- Коваль Е. А. Статины в лечении и профилактике сердечно-сосудистых заболеваний [Электронный ресурс] / Е. А. Коваль // Therapia. Український медичний вісник. – 2006. – № 5 (05). – С. 5. – Режим доступа: http://therapia.ua/therapia/2006-/05-/statiny—v—lechenii—i—profilaktike—serdechno—sosudistykh—zabolevanii.
- ФС 42-0276-07. Симвастатин // Государственная фармакопея Российской Федерации. – 12-е изд.– М., 2008. – Ч. 1. – С. 704.
- Попова Н. М. Методика количественного определения β-гидроксисимвастатина в плазме крови / Н. М. Попова // Российский медико-биологический вестник имени академика И. П. Павлова. – 2011. – № 4. – С.141–146.
- ФС Аторвастатин [Электронный ресурс] – Режим доступа: https://static1.rosminzdrav.ru/system/attachments/attaches/000/032/130/original, свободный.
- Количественное определение аторвастатина для проведения терапевтического лекарственного мониторинга, установления фенотипирования по активности CYР450 и межлекарственного взаимодействия у больных ИБС / В. И. Петров, Л. А. Смирнова, О.В.Магницкая, А. Ф. Рябуха, К. А. Кузнецов, Е. А. Сучков // Биомедицина. – 2010. – № 3. – С. 111–112.
- Особенности количественного определения аторвастатина в плазме крови пациентов с ишемической болезнью сердца /А. Ф. Рябуха, К. А. Кузнецов, О. В. Магницкая, Л. А. Смирнова, Е. А. Сучков, А. А. Ефимова, Б. Е. Толкачев // Вестник ВолгГМУ. – 2011. – Вып. 1 (37). – С. 53–56.
Uskova Elena
PhD in Chemistry, associate Professor, Department Analytical Chemistry, Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education «National Research Ogarev Mordovia State University»
Rudenko Alyena
student, Institute of Medicine, Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education «National Research Ogarev Mordovia State University»
Romanova Ella
PhD in Chemistry, associate Professor, Department Biological and Pharmaceutical Chemistry, Pharmacy Organization and Management, Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education «National Research Ogarev Mordovia State University»
Labzina Ludmila
PhD in Biology, Professor, Department Biological and Pharmaceutical Chemistry, Pharmacy Organization and Management, Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education «National Research Ogarev Mordovia State University»
APPLICATION OF CHROMATOGRAPHY TECHNICS IN QUANTITATIVE ANALYSIS OF STATINS
The article analyzes the application of high-performance liquid chromatography (HPLC) method for quantitative determination of hypolipidemic medicine of statins class – simvastatin and atorvastatin.
Keywords: high-performance liquid chromatography (HPLC), statins, simvastatin, atorvastatin.
© АНО СНОЛД «Партнёр», 2017
© Ускова Е. Н., 2017
© Руденко А. И., 2017
© Романова Э. В., 2017
© Лабзина Л. Я., 2017